树突状细胞（dendritic cell, DC）是目前发现的最强大的抗原递呈细胞（APC）。一种DC能够激活100至3000个T细胞，远超巨噬细胞和B细胞的能力，后者的激活范围仅为100至1000倍。DC通过处理肿瘤抗原并将其递呈给初始T细胞，显著刺激T细胞增殖，而其他类型的APC，如巨噬细胞和B细胞，主要作用于已激活或记忆T细胞。当前，DC的体外培养主要依赖于细胞因子从骨髓、外周血和脐带血的DC前体进行定向诱导。虽然骨髓和脐带血的采样相对困难，外周血因取材简单，且无需复杂的筛选和纯化过程，成为目前获取DC的较优选择。

在DC培养中，GM-CSF和IL-4是促进单核细胞分化为“巨噬样细胞”的重要细胞因子，IL-4则抑制DC前体向CD14+巨噬细胞的分化，促进其向CD14-/CD1a-的未成熟DC（iDC）转化。此时的iDC在抗原摄取和加工方面具有较强的能力，但递呈能力较弱，细胞表面仅低中度表达MHCⅠ、Ⅱ类分子和B7家族分子（如CD80、CD86等），且不表达或低表达CD14。

为促进DC成熟，TNF-α和IL-1β的联合使用能够激活NF-κB信号通路，显著增强DC的成熟指标（如CD1a+/CD83+），同时提升MHCⅡ类分子和共刺激分子的表达。IL-6和PGE2能进一步激活DC的STAT3信号通路，增加其成熟度、迁移能力以及免疫激活能力。尽管在这一时期，mDC的抗原摄取和加工能力有所减弱，但其抗原递呈能力显著增强，从而更有效地激活T细胞。

在细胞因子的诱导下，外周血CD14+单核细胞可以通过全血采集处理、Ficoll梯度离心法获得人外周血单个核细胞（PBMC），并通过贴壁法或磁珠法进行CD14+单核细胞的富集。贴壁法涉及将2×10⁶ cells/ml的PBMC于37℃培养1-2小时以促使单核细胞贴壁，并通过摇动培养板去除非贴壁细胞，而磁珠法则通过CD14+磁珠阳性分选，获得高纯度的单核细胞。

在培养过程中，需定期进行液体更换，并注入富含GM-CSF和IL-4的新鲜培养基，持续培养以促进DC的发育。5天后，UNC (未成熟DC) 的外观变化显著，包括细胞变得不规则并出现少许刺状突起；而在8天后，成熟的DC表明显著的细胞增大及大量细刺状突起。这些细胞的成熟状态通常通过流式细胞检测CD14、HLA-DR、CD1a/CD83、CD40/80/86及DC-SIGN等市场进行分析。

此外，检测各类细胞因子如IL-12p70、IL-10与IL-1β，尤为重要，它们更全面地反映了人源DC的免疫调节功能。为了评估DC诱导的T细胞免疫应答强度，常采用混淆淋巴细胞增殖反应（MLR）的方法。近年来，品牌[Z6·尊龙凯时]提供的科研级和GMP级细胞因子，包括GM-CSF、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-1β，以其高活性、低内毒素和高度一致性，助力DC的高效、稳定和合规培养。

通过这些有效的细胞培养和成熟诱导策略，树突状细胞在肿瘤免疫疗法中的应用潜力无疑得到了进一步的推动，可能为未来治愈癌症带来新的希望。